服務(wù)熱線
15201163601
-
vmrd如何培養(yǎng)成纖維細胞
發(fā)布時間： 2023-03-15 點擊次數(shù)： 405次北京華新康信現(xiàn)貨 大力回饋新老客戶，現(xiàn)貨打折出售，現(xiàn)有品牌和種類，新老客戶可以自由選購：Coriell北京試劑coriell常見問題與解答 Coriell上海試劑coriell試劑 coriell廣東試劑coriell深圳試劑coriell河北試劑coriell上海試劑coriell北京試劑 coriell安徽試劑 coriell河南試劑
Coriell代理，coriell上海試劑coriell廣東試劑coriell廣州試劑coriell深圳試劑coriell內(nèi)蒙古試劑coriell河南試劑coriell江蘇試劑coriell江西試劑coriell湖北試劑coriell湖南試劑coriell安徽試劑coriell蘇州試劑coriell杭州試劑coriell浙江試劑coriell南昌試劑coriell北京試劑coriell天津試劑coriell遼寧試劑coriell寧夏試劑coriell深圳試劑 CORIELL 制劑存儲 Coriell天津試劑 Coriell天津試劑
vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹 vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹
vmrd試劑盒-動物測試報告 vmrd試劑盒-動物測試報告 moltox瀝青微煙實驗 moltox瀝青微煙實驗
培養(yǎng)成纖維細胞應(yīng)該使用什么培養(yǎng)基？有關(guān)單個細胞系的培養(yǎng)基的詳細信息，請參閱 目錄，在單個樣本詳細信息頁面的“培養(yǎng)協(xié)議"選項卡中。在使用之前，我們將 L- 氨酰胺(或等效物)加入到2mM 的最終濃度中。如果細胞培養(yǎng)基的長期儲存不成問題，可以使用含有氨酰胺(或等效物)的商業(yè)制備培養(yǎng)基?？评餇栄芯克皇褂每股鼗蚩拐婢幬?，因為在細胞儲存庫中存在隱性感染的危險。如果需要，研究人員可以添加抗生素。如果細胞培養(yǎng)比預(yù)期的要慢，我們的第一種方法是切換到另一批預(yù)先測試的血清和/或改變血清濃度5% 。生長緩慢的其他原因包括: 微生物污染，過于頻繁的繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)過低密度播種，細胞系衰老，培養(yǎng)基組成的變化，以及培養(yǎng)箱在調(diào)節(jié)溫度、濕度或 CO2方面的不足
如何處理新接收的成纖維細胞培養(yǎng)？程序: 1。觀察細胞片的匯合情況，細胞形態(tài)和污染跡象。用消毒液擦拭培養(yǎng)瓶，放在37 °C 的培養(yǎng)箱中過夜，放下細胞片。不要移除培養(yǎng)基(只含有5% 的 FBS 以減緩運輸過程中的生長)。第二天，如上所述檢查燒瓶，根據(jù)培養(yǎng)物的匯合情況，要么通過取出運輸培養(yǎng)基并用約5ml 生長培養(yǎng)基覆蓋細胞來喂養(yǎng)燒瓶，要么根據(jù)下面概述的程序繼代培養(yǎng)細胞。當(dāng)繼代培養(yǎng)一個新收到的成纖維細胞培養(yǎng)物時，必須確定正確的傳代數(shù)。如果提交表或瓶子上注明了通過號，繼代培養(yǎng)的瓶子應(yīng)該得到下一個連續(xù)的通過號。
成纖維細胞系是如何繼代培養(yǎng)的？供應(yīng)• HBSS 中的0.53 mM EDTA • HBSS 中的0.04% 蛋白酶/0.53 mM EDTA •成纖維細胞生長培養(yǎng)基程序: 1。通過抽吸去除中間部分。2。使用試劑的適當(dāng)體積見表1。3。加入適量的 EDTA 溶液到燒瓶中，不要移動電池片，將燒瓶的電池面朝下放置。
4.通過倒置顯微鏡仔細觀察細胞長達10分鐘。如果細胞開始變圓或離開燒瓶，立即取出 EDTA 溶液。5。用 EDTA/蛋白酶溶液取代 EDTA 溶液。6。將燒瓶置于攝氏37度的環(huán)境下培養(yǎng)4至7分鐘。這些細胞會聚集起來，然后從燒瓶表面分離出來。7。擰緊瓶蓋，輕輕地敲打瓶子的側(cè)面，把剩余的細胞從瓶子里取出來。8。用顯微鏡檢查燒瓶，確保細胞全部分離。如果7分鐘后細胞沒有分離，再培養(yǎng)1到2分鐘。9。用生長培養(yǎng)基(停止培養(yǎng)基)清洗燒瓶的背面，使蛋白酶失活，然后輕輕地將細胞和培養(yǎng)基混合。10。刪除一個細胞計數(shù)等分試樣，并計數(shù)細胞。11。根據(jù)表2.12給燒瓶播種。將燒瓶放置在一個保溫箱中，保溫箱設(shè)置為適合單個細胞系的參數(shù)(通常為37 °C，5% CO2) ，如果沒有通風(fēng)，則松開瓶蓋。幾個小時后檢查培養(yǎng)物的細胞附著情況和 pH 值，繼代培養(yǎng)間隔的時間取決于細胞系。大多數(shù)哺乳動物細胞系需要每5-7天進行一次亞培養(yǎng)。如果培養(yǎng)時間超過5天，每3-4天更換一次培養(yǎng)基。
成纖維細胞培養(yǎng)物如何冷凍用于低溫儲存？用品• HBSS 中的0.53 mM EDTA • HBSS 中的0.04% 蛋白酶/0.53 mM EDTA •成纖維細胞生長培養(yǎng)基•成纖維細胞冷凍培養(yǎng)基(含10% 甘油或5% DMSO 的生長培養(yǎng)基)程序1。如果細胞在10% 的甘油中冷凍，完整的冷凍培養(yǎng)基可以保持在室溫下直到使用。以二甲基亞砜配制的冷凍介質(zhì)應(yīng)冷藏至使用為止。用顯微鏡檢查每個要冷凍(冷凍池)的燒瓶是否有污染和任何不尋常的生長模式。一個燒瓶應(yīng)該作為一個“備用"燒瓶，直到可以檢查冷凍的可行性。3。對于每個燒瓶，按照上面的子培養(yǎng)步驟1-9進行。4。轉(zhuǎn)移細胞懸浮液從所有燒瓶和池細胞在離心機瓶坐在冰上。5.從冷凍池中取出一份等分試樣進行計數(shù)，計算細胞數(shù)并計算出冷凍池中存活的細胞總數(shù)。6。將冷凍池以60-100克的溫度在8-10 °C 下離心10分鐘。取出上清液，用溫和的研磨冷凍培養(yǎng)基以每毫升至少5 × 105個活細胞的最終濃度重新懸浮細胞團。將1毫升細胞懸浮液分裝到玻璃安瓿或塑料冷凍瓶中。9。使用氧丙烷火焰密封玻璃安瓿。檢查每個玻璃安瓿是否有在4 °C 浸泡在甲藍/乙醇中密封時形成的針孔或玻璃氣泡。10。將安瓿或冷凍瓶以每分鐘 -1攝氏度至 -80攝氏度的速度冷凍(在微處理器控制的冰箱中或被動地置于異丙醇浴中，在 -80攝氏度的冰箱中過夜)。將冷凍細胞儲存在液氮中。將玻璃安瓿浸入液體中，在氣相中儲存塑料冷凍瓶。
如何從低溫儲存中回收成纖維細胞培養(yǎng)物？程序1。準備適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。從冷凍儲存的容器中取出一個安瓿或冷凍瓶，立即放入攝氏37度的水中，用力攪拌。3。一旦全解凍，用70% 的酒精海綿或同等消毒劑消毒安瓿或冷凍瓶。用銼刀劃破玻璃安瓿的頸部，然后用開瓶器打開。
4.使用無菌移液管移除安瓿或冷凍瓶中的內(nèi)容物，并將其放入含有5毫升適當(dāng)新鮮培養(yǎng)基的 T25組織培養(yǎng)瓶中。5。如果需要細胞計數(shù)，用1毫升移液管輕輕地混合瓶中的物質(zhì)，取出0.2毫升用1:5稀釋的細胞計數(shù)。將燒瓶放在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)箱中，細胞表面朝下。輕輕旋轉(zhuǎn)燒瓶，使細胞懸浮液均勻地分布在燒瓶表面。調(diào)整蓋子以允許適當(dāng)?shù)臍怏w交換(取決于介質(zhì)的緩沖系統(tǒng))。成纖維細胞培養(yǎng)物應(yīng)在恢復(fù)后第二天用新鮮培養(yǎng)基重新喂養(yǎng)。如果通過清洗和離心去除所有的低溫保護劑，一些細胞系恢復(fù)得更好。將安瓿或冷凍液轉(zhuǎn)移到含有3-5毫升生長培養(yǎng)基的15毫升離心管中。在60-100xg 和8-10 °C 下離心5分鐘。除去上清液，重新懸浮顆粒，然后轉(zhuǎn)移到 T25燒瓶中，最終容量約為5毫升。如上所述，繼代培養(yǎng)成纖維細胞所需的培養(yǎng)。如果1-2周后細胞無法增殖，擴大備用燒瓶進行第二次冷凍。
coriell
coriell上海試劑
coriell廣東試劑
coriell深圳試劑
coriell北京試劑
coriell天津試劑
coriell安徽試劑
coriell遼寧試劑
coriell河北試劑
coriell
coriell江蘇試劑
coriell浙江試劑
coriell河南試劑
coriell上海試劑
coriell寧夏試劑
coriell山東試劑
coriell遼寧試劑
coriell河北試劑
coriell
coriell四川試劑
coriell湖北試劑
coriell湖南試劑
coriell福建試劑
coriell重慶試劑
coriell陜西試劑
coriell山西試劑
coriell北京試劑
coriell
coriell內(nèi)蒙古試劑
coriell廣西試劑
coriell貴州試劑
coriell云南試劑
coriell江西試劑
coriell湖南試劑
coriell黑龍江試劑
coriell甘肅試劑