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alpco問題與解答

所有孔變?yōu)榱了{(lán)色用于比色測(cè)定

鋼板清洗不足

對(duì)于自動(dòng)清洗機(jī)：檢查噴嘴是否堵塞，驗(yàn)證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。

對(duì)于手動(dòng)沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動(dòng)洗板機(jī)，特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時(shí)。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

不要跳過清洗或浸泡步驟。如果不在SA-HRP和底物步驟之間清洗，將導(dǎo)致所有井顯示非常高的信號(hào)。

酶綴合物污染底物

確保所有容器清潔且標(biāo)記清晰。檢查TMB是否為藍(lán)色。如果TMB變?yōu)樗{(lán)色，請(qǐng)不要在化驗(yàn)中使用，并聯(lián)系產(chǎn)品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個(gè)組分。

高背景（空白或0標(biāo)準(zhǔn)值過高）

鋼板清洗不足

對(duì)于自動(dòng)清洗機(jī)：檢查噴嘴是否堵塞，驗(yàn)證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。

對(duì)于手動(dòng)沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗?？紤]從清洗瓶切換到手持式歧管或自動(dòng)洗板機(jī)，特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時(shí)。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

不要跳過清洗或浸泡步驟。

舊的或受污染的洗滌緩沖液

清洗緩沖液存放時(shí)間過長或留在自動(dòng)清洗管中會(huì)導(dǎo)致污染。根據(jù)需要準(zhǔn)備新鮮的洗滌緩沖液，并定期清潔自動(dòng)洗滌設(shè)備。

酶綴合物污染底物

確保所有容器清潔且標(biāo)記清晰。檢查TMB是否為藍(lán)色。如果TMB變?yōu)樗{(lán)色，請(qǐng)不要在化驗(yàn)中使用，并聯(lián)系產(chǎn)品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個(gè)組分。

錯(cuò)誤的共軛稀釋

高于正常濃度可能導(dǎo)致背景升高。檢查殘余體積并確認(rèn)綴合物制備正確。

讀板器中使用了錯(cuò)誤的過濾器

確認(rèn)在讀取銘牌時(shí)使用了協(xié)議中指示的正確過濾器。包括使用說明中所示的建議減去空白或OD讀數(shù)。

標(biāo)準(zhǔn)品和樣品無顯色或OD讀數(shù)非常低

讀板器中使用了錯(cuò)誤的過濾器

確認(rèn)在讀取銘牌時(shí)使用了協(xié)議中指示的正確過濾器。

試劑配制錯(cuò)誤

確保所有容器都有清晰的標(biāo)記，并將適當(dāng)?shù)臐饪s液和稀釋劑添加到正確的小瓶中，以使每個(gè)“工作"成分用于分析。

試劑混合不充分

使用前，讓重組試劑放置在手冊(cè)中所示的時(shí)間長度內(nèi)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備（渦流混合器等）確保試劑在使用前是均勻的。

板材晃動(dòng)不足

不正確的搖動(dòng)運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動(dòng)板。建議使用半徑很小的軌道運(yùn)動(dòng)振動(dòng)器。參見示例。

試劑中的混合

如果一次運(yùn)行多個(gè)分析，請(qǐng)將試劑分開以避免混淆。在向分析板添加試劑之前，仔細(xì)檢查試劑標(biāo)簽。

試劑被污染或添加順序錯(cuò)誤

驗(yàn)證所有化驗(yàn)成分的外觀、儲(chǔ)存條件和有效期。按照協(xié)議中的步驟進(jìn)行操作。確保按正確順序添加每個(gè)組件。

使用了備用部件批次或過期部件

某些組件具有高度的批次特異性。務(wù)必與制造商核實(shí)是否使用了備用部件批次。不要使用過期的試劑。

未正確遵循分析培養(yǎng)時(shí)間

遵循方案中所示的培養(yǎng)時(shí)間和溫度。降低任一因素都會(huì)影響測(cè)定動(dòng)力學(xué)，并可能導(dǎo)致低信號(hào)。如果方案列出了TMB培養(yǎng)的時(shí)間范圍，則確保在建議的最長時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)試驗(yàn)。

延遲讀取板材

如果進(jìn)行化學(xué)發(fā)光ELISA，則應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)讀取平板。有關(guān)套件特定時(shí)間，請(qǐng)參閱協(xié)議。延遲讀取印版會(huì)導(dǎo)致信號(hào)降低。

僅樣品無顯色或OD讀數(shù)非常低

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的錯(cuò)誤

調(diào)查樣品來源。如果可能，使用替代方法測(cè)試樣品，以確認(rèn)樣品在工作測(cè)定范圍內(nèi)對(duì)感興趣的生物標(biāo)志物應(yīng)為陽性。當(dāng)刺激生物標(biāo)志物生產(chǎn)時(shí)，可能需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

樣品處理不正確

確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時(shí)間暴露。驗(yàn)證樣品未經(jīng)歷重復(fù)的凍融循環(huán)。如果可能，在≤-70°C的溫度下等分并儲(chǔ)存樣品。

樣本稀釋計(jì)算錯(cuò)誤

驗(yàn)證樣品稀釋度是否正確。如有必要且在試劑盒規(guī)格范圍內(nèi)，以較高濃度（較低稀釋度）重新測(cè)試樣品。

未驗(yàn)證的樣本類型

未經(jīng)驗(yàn)證的樣品類型可能與試劑盒的測(cè)定緩沖液或測(cè)定范圍不兼容。

板材晃動(dòng)不足

不正確的搖動(dòng)運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動(dòng)板。建議使用半徑很小的軌道運(yùn)動(dòng)振動(dòng)器。參見示例。

控制超出范圍

試劑處理不正確

確保試劑已正確儲(chǔ)存和處理，且在有效期內(nèi)。注意，一些試劑在重構(gòu)后的保質(zhì)期有限。

標(biāo)準(zhǔn)曲線差

驗(yàn)證是否使用了適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)照先前分析的值和分析證書中給出的值檢查結(jié)果。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱“較差標(biāo)準(zhǔn)曲線"部分。注：對(duì)于化學(xué)發(fā)光測(cè)定，不同的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)器的RLU可能會(huì)有很大差異。

標(biāo)準(zhǔn)品和/或?qū)φ掌分貥?gòu)錯(cuò)誤

有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品和對(duì)照品重構(gòu)的正確體積和緩沖液，請(qǐng)參見方案和批次特定分析證書。使用前，讓重組試劑放置在手冊(cè)中所示的時(shí)間長度內(nèi)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備（渦流混合器等）確保試劑在使用前是均勻的。

使用了錯(cuò)誤的曲線擬合

使用方案中建議的曲線擬合。如果提供了多個(gè)建議，請(qǐng)使用適合標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)點(diǎn)的回歸方法。強(qiáng)烈建議使用帶有4參數(shù)和5參數(shù)回歸選項(xiàng)的軟件程序。

樣本的意外結(jié)果

樣品制備不當(dāng)

按照方案中的方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)臉悠分苽?。確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時(shí)間暴露。驗(yàn)證樣品未經(jīng)歷重復(fù)的凍融循環(huán)。如果可能，在≤-70°C的溫度下等分并儲(chǔ)存樣品。

樣本ID混淆

檢查樣本ID，以確認(rèn)其已正確標(biāo)記并添加到平板上。

樣品稀釋誤差

如有必要，驗(yàn)證樣品稀釋度是否正確，外推的樣品值是否與正確的稀釋系數(shù)相乘。

報(bào)告單位的差異

驗(yàn)證報(bào)告的計(jì)量單位與分析的計(jì)量單位一致。執(zhí)行任何必要的換算計(jì)算。當(dāng)比較不同試劑盒中獲得的值時(shí)，如果有參考標(biāo)準(zhǔn)，確保校正化驗(yàn)校準(zhǔn)中的任何差異。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的錯(cuò)誤

調(diào)查樣品來源。如果可能，使用替代方法測(cè)試樣本，以確認(rèn)預(yù)期樣本值。當(dāng)刺激生物標(biāo)志物生產(chǎn)時(shí)，可能需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

干擾物質(zhì)

考慮與樣本基質(zhì)（如使用抗凝劑）、臨床診斷（如類風(fēng)濕因子）或治療相關(guān)的潛在干擾物質(zhì)。

特異性

由于糖基化、蛋白質(zhì)折疊和抗體特異性的差異，不同系統(tǒng)（大腸桿菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞系）中表達(dá)的天然蛋白質(zhì)和重組蛋白質(zhì)的識(shí)別可能有所不同。不同供應(yīng)商的套件可能會(huì)有不同的認(rèn)可度。

含量漂移：從板開始到結(jié)束的值差異

因重組或稀釋導(dǎo)致的延遲

在開始化驗(yàn)工作流程之前，準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和稀釋樣品。

試劑不在溫度下

在開始化驗(yàn)前，確保所有所需試劑處于使用說明書中規(guī)定的室溫。

向第一口井和最后一口井添加試劑之間的延長時(shí)間

如果可能，在稀釋板或微量滴定管中制備標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品，然后使用多通道移液管轉(zhuǎn)移至測(cè)定板。使用試劑容器和多通道移液管將常用試劑添加到測(cè)定板中。

批間變異性（對(duì)照品或在不同平板上測(cè)試的樣品的精度差）

操作員間可變性

觀察試劑制備、移液技術(shù)和測(cè)定時(shí)間的差異。

移液管校準(zhǔn)的差異

移液管校準(zhǔn)的差異可能會(huì)導(dǎo)致可變性，特別是在移液量較小時(shí)。

儀器儀表的差異

當(dāng)在同一天或不同的日子在多個(gè)平板上測(cè)試樣品或?qū)φ掌窌r(shí)，應(yīng)在相同的設(shè)置下使用相同的平板振動(dòng)器、平板清洗器和平板讀取器。

環(huán)境條件的變化

注意溫度的差異。請(qǐng)記住，一般室溫、靠近窗戶（尤其是在非常寒冷或非常晴朗的日子）以及靠近可能會(huì)散發(fā)熱量的儀器可能會(huì)影響化驗(yàn)溫度。

樣品處理的差異

額外的凍融循環(huán)或在室溫或冰箱中增加的時(shí)間可能會(huì)影響樣品結(jié)果。

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