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Toxin代安徽試劑
產(chǎn)品時間:2024-02-22
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三型副雞禽桿菌對SPF雞的致病力試驗方法

112 培養(yǎng)基 半合成培養(yǎng)基、雞血清雞肉湯和雞

血清雞肉湯瓊脂。參照馮文達等[9]的方法制備。

113 試驗用雞 12035日齡 SPF ?購自北

京實驗動物中心?在北京所負壓隔離器內飼養(yǎng)至57

日齡。

12 方法

121 細菌培養(yǎng) 取凍干卵黃?用普通肉湯稀釋

后?接種雞血清雞肉湯瓊脂?于體積分數(shù)為5 CO2

37℃培養(yǎng)24h48h?挑取典型菌落接種雞血清

雞肉湯?在37℃培養(yǎng)10h12hB 型)和18 h

24hA 型和 C 型)?分裝保存于-80 ℃冰柜的同

時?進行活菌計數(shù)和純粹性檢驗[10]。

122 試驗分組 將120只試驗用雞隨機分成3

組?A 型菌組40只雞?B 型菌組35只雞?C 型菌組

45只雞(表1)。

123 攻毒 從-80℃取出純粹性檢驗合格活菌

計數(shù)過的 A、BC 型菌液?按照保存前計數(shù)的活菌數(shù)

用半合成培養(yǎng)基進行稀釋?每個劑量注射5只雞?

只雞眶下竇內注射02mL。所含 cfu02mL 如表

1。攻毒后24h 開始逐只檢查每只雞的發(fā)病情況?

每天檢查1?共檢查7d10]。

124 細菌分離 在攻毒后96h?攻毒劑量最小組

15×104 cfu02mL)各隨機取2只雞?進行細菌

分離[6-8?粗提 DNA?進行 PCR9?11-12]。

2 結果

21 細菌培養(yǎng)和活菌計數(shù)

B 型副雞禽桿菌 BJ-05株在雞血清雞肉湯培養(yǎng)

基 中培養(yǎng)10h ?菌液渾濁?計數(shù)結果為10×

108cfumL;A 型副雞禽桿菌 C-Hpg8CVCC254)在

雞血清雞肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h ?可見細菌明顯

生長?計數(shù)結果為02×108cfumL;668株在雞血清

雞肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)20h ?菌液較渾濁?計數(shù)結

果為4×108cfumL。純檢結果均未發(fā)現(xiàn)有其他細

菌生長。

22 攻毒雞只發(fā)病情況

攻毒后24h168h?每天逐只檢查雞只的發(fā)病

情況。攻毒后24h?3大組雞只大部分發(fā)病?表現(xiàn)為

眶下竇腫脹?流鼻汁、有少數(shù)雞只面部水腫。攻毒后

48h? A 30×104cfu02mL 組和 B 100×

104cfu02mL 組各有1只雞沒有發(fā)病外?其余118

只雞均發(fā)病?且大部分雞只呈現(xiàn)明顯的雞傳染性鼻

炎臨床癥狀?眶下竇明顯腫脹?鼻孔周圍黏附飼料?

面部水腫明顯?公雞肉垂水腫。攻毒后72 h?A

30×104cfu02mL 組的5只雞全部發(fā)病?其余基

本與攻毒后48h 相同。攻毒后第4天至第5?發(fā)

病雞數(shù)和臨床癥狀與攻毒后72h 相同。至第6?

部分發(fā)病雞只臨床癥狀減輕至消失?攻毒后第7?

除少數(shù)雞只外?大部分雞只臨床癥狀消失。攻毒后

24h72h 的詳細發(fā)病情況見表2。表2中的"

眶下竇腫脹明顯?面部水腫?鼻汁多?有的雞只眼睛

一過性失明?公雞肉垂水腫。+++"表示眶下竇

腫脹較明顯?鼻汁較多;++"表示眶下竇腫脹?

鼻汁;“+"表示用手擠壓時流出鼻汁。

23 細菌分離和 PCR 鑒定

A 型、B 型和 C 型各2只雞的眶下竇均分離

到純的副雞禽桿菌?將它們接種普通肉湯和普通瓊

脂?37℃培養(yǎng)96h?均未見細菌生長。用6個分離株

的粗提 DNA 進行 PCR?結果66陽性?與標準陽性

對照大?。?span>0.5kb)一致(圖1

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