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使用單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體 226 008 改進(jìn)您的 c-Fos 實(shí)驗(yàn)

 原癌基因 c-fos 屬于即刻早期基因 (IEGs)，在大腦中快速而短暫地表達(dá) (Herrera 和 Robertson，1996)。它可以由各種刺激誘導(dǎo)，通常用作神經(jīng)元激活的標(biāo)志物（Morgan 等，1987；Gaiddon 等，1996；Chowdhury 等，2000；Gallo 等，2018；Wakhloo 等。 , 2020)。像許多其他 IEG 一樣，c-Fos 是一種轉(zhuǎn)錄因子。它作為異二聚體與 c-Jun 結(jié)合到 AP-1 結(jié)合位點(diǎn)（圖 1），并增強(qiáng)許多其他參與增殖、分化、凋亡或炎癥的基因的表達(dá)（Ye 等人，2014 年）。

c-Fos 實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)

動物處理：在計(jì)劃對動物進(jìn)行 c-Fos 實(shí)驗(yàn)時(shí)，您應(yīng)該了解影響您研究的技術(shù)缺陷。例如，您應(yīng)該考慮 c-Fos 表達(dá)是時(shí)間依賴性的，易受壓力影響，并且可以在幾分鐘后檢測到（Herrera 和 Robertson，1996）。重要的是要考慮到許多因素，如動物處理本身（例如針頭注射）或在黑暗階段暴露在光線下（晝夜節(jié)律激活）會影響 c-Fos 表達(dá)（Asanuma 和 Ogawa，1994 年；Herrera 和 Robertson，1996 年） ）。因此，必須在適當(dāng)?shù)膶φ战M中準(zhǔn)確地計(jì)劃和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以避免假陽性結(jié)果。

IHC 方案：您應(yīng)該關(guān)心的另一點(diǎn)是您的免疫組織化學(xué) (IHC) 方案。似乎 c-Fos 陽性細(xì)胞的總數(shù)取決于閾值。許多參數(shù)會影響 c-Fos 陽性細(xì)胞的可檢測數(shù)量：組織儲存條件、切片方法（低溫恒溫器或振動切片機(jī)）、染色參數(shù)（例如孵育溫度）、信號增強(qiáng)試劑（Berghorn 等，1994；Werner 等， 1996 年；Mayer 和 Bendayan，2001 年），最重要的是，一抗選擇。

c-Fos 抗體：一抗的特異性、靈敏度和信噪比不同，這些特性會影響您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，我們的目標(biāo)是提供高度特異性和一致的 c-Fos 抗體，以支持科學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。由于單克隆抗體與多克隆抗體相比具有多項(xiàng)優(yōu)勢，因此我們開發(fā)了一種新的單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體。

單克隆重組 c-Fos 抗體的優(yōu)勢

抗體具有由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的共同結(jié)構(gòu)（圖 2）。重鏈和輕鏈都包含負(fù)責(zé)目標(biāo)識別的物種特異性恒定區(qū)和可變序列（Davies 和 Metzger，1983）。

在源自特定雜交瘤細(xì)胞系的單克隆抗體制劑中，所有單個(gè)抗體分子都是相同的，并共享相同的抗原識別位點(diǎn)。相比之下，多克隆抗體（如兔 c-Fos 抗體 226 003）由靶識別序列不同的抗體分子混合物組成。一旦血清用完，就必須對新動物進(jìn)行免疫。獲得的新血清包含具有新的特異性和親和性的 c-Fos 抗體的新混合物，導(dǎo)致關(guān)于多克隆 c-Fos 抗體的實(shí)驗(yàn)性能的批次之間的差異。

使用我們的單克隆重組兔 c-Fos 抗體 226 008，我們*地解決了批次間差異的問題。我們對我們一貫表現(xiàn)良好的大鼠單克隆 c-Fos 抗體 226 017 的 c-Fos 目標(biāo)識別域進(jìn)行了測序，并將它們?nèi)诤系酵?/span> IgG 的恒定抗體區(qū)域（圖 3）。

這種高度明確的單克隆重組抗體可以在受控條件下作為無限資源在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)，并且批次之間的差異最小。它在我們測試的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中表現(xiàn)出好的性能，相當(dāng)于甚至優(yōu)于我們好的兔多克隆 c-Fos 批次（圖 4）。雖然多克隆兔抗 c-Fos 抗體 226 003 對實(shí)驗(yàn)條件的變化非常敏感（例如，IHC 實(shí)驗(yàn)中的孵育溫度對信號強(qiáng)度有影響），但單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體 226 008導(dǎo)致在各種實(shí)驗(yàn)設(shè)置中獲得穩(wěn)健的染色結(jié)果，因此是您實(shí)驗(yàn)的*。

隨著時(shí)間的推移，這種單克隆抗體將用于許多不同的應(yīng)用，收集到的所有信息都將有助于更好地表征這種研究試劑。

與多克隆抗體相比，這些信息會積累并且永遠(yuǎn)不會丟失，使這種研究試劑成為您手中越來越有價(jià)值和可靠的工具。

圖 4：標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用 WB、ICC、IHC 和 IHCP 中 SySy c-Fos 抗體“226 003"、“226 017"和“226 008"的比較

圖 4：單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體 226 008 在我們所有的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中都表現(xiàn)出優(yōu)異的性能。在相同實(shí)驗(yàn)條件下將重組兔抗c-Fos抗體226 008與單克隆大鼠抗c-Fos抗體226 017和多克隆兔抗c-Fos抗體226 003進(jìn)行比較。在 IHC 和 IHC-P 實(shí)驗(yàn)中，c-Fos 抗體用于小鼠和大鼠海馬切片的間接免疫染色（顯示小鼠切片；IHC：c-Fos = 紅色，DAPI = 藍(lán)色；IHC-P：c-Fos = 棕色，蘇木精 = 藍(lán)色）。在 ICC 實(shí)驗(yàn)中，c-Fos 抗體用于大鼠海馬神經(jīng)元的間接免疫染色（c-Fos = 紅色，MAP 2 188 011/188 002 = 綠色，DAPI = 藍(lán)色）。在蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中，在 TPA 刺激的 HeLa 細(xì)胞的核提取物中檢測到 c-Fos（檢測：AP 染色）。

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