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T細(xì)胞活化

抗原和共刺激信號對幼稚 T 細(xì)胞的激活啟動了 CD4+ 輔助和 CD8+ 細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞的克隆擴增。除了 T 細(xì)胞增殖外，多種信號通路被激活，導(dǎo)致功能性細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達和細(xì)胞因子的釋放。

專注于利用免疫系統(tǒng)靶向癌癥的療法（雙特異性、檢查點抑制劑抗體和 CAR-T 細(xì)胞）市場正在不斷增長。監(jiān)測和量化激活曲線的能力有助于更好地了解 T 細(xì)胞如何對某些刺激作出反應(yīng)，進而可以深入了解藥物能夠如何利用免疫系統(tǒng)的力量。

分析概念

在單個孔中測量 T 細(xì)胞活化、增殖和細(xì)胞因子釋放的多重方法。

圖 1. 人類 T 細(xì)胞激活試劑盒檢測原理說明。針對 3 種激活標(biāo)志物的表達分析了不同的 T 細(xì)胞表型：CD69（早期）、CD25（晚期）和 HLA-DR（甚至更晚）。2 種效應(yīng)細(xì)胞因子（IFNγ 和 TNFα）也使用 2-plex Qbeads 在同一孔中以夾心免疫測定形式進行量化?？梢酝瑫r測量 T 細(xì)胞增殖或編碼的靶細(xì)胞，但不包括在此插圖中。

主要優(yōu)勢

在生理相關(guān)模型中獲得對 T 細(xì)胞活化狀態(tài)的更多生物學(xué)見解

同時量化表面蛋白和細(xì)胞因子的表達

易于使用和解釋；預(yù)定義的門控策略

最少的樣品操作：小體積、一次洗滌、無需稀釋、混合和讀取

圖 2. 激酶抑制劑篩選突出了人類 T 細(xì)胞激活曲線的變化。

PBMC 用一組激酶抑制劑 (20 µM) 處理一小時。然后添加 CD3/CD28 Dynabeads 以刺激激活 24 小時。使用 T 細(xì)胞激活細(xì)胞和細(xì)胞因子分析試劑盒和 iQue 系統(tǒng)分析 10 µL 樣品。

(A) CD4+CD69+ 門控策略的板視圖。綠色框標(biāo)識僅媒體控件。紅框標(biāo)識環(huán)孢菌素對照。黃色框標(biāo)識圖 BD 上顯示的化合物（1：魯索替尼；2：雙吲哚基馬來酰亞胺 I；3：AZD 7762）。

(B, C) CD4+ 和 CD8+ 細(xì)胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表達。

(D)從 PBMC 釋放 IFNγ 和 TNFα 細(xì)胞因子。

同時量化表面蛋白和細(xì)胞因子的表達

圖 3. 量化從不同供體分離的 PBMC 的激活曲線和細(xì)胞因子釋放的變異性。

SKOV-3 細(xì)胞與來自 3 個供體的 PBMC（10K/孔）在共培養(yǎng)試驗中接種（4K/孔）。激活由 CD3/CD28 Dynabeads 誘導(dǎo)。4 天后按照貼壁細(xì)胞提升方案提升細(xì)胞，并使用 T 細(xì)胞激活細(xì)胞和細(xì)胞因子分析試劑盒進行分析。(AC)早期 (CD69)、晚期 (CD25) 甚至晚期 (HLA-DR) T 細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達。(D)每個供體釋放 IFNγ。

最少的樣品操作：小體積，一次洗滌，無需稀釋

將細(xì)胞和上清液作為一個樣本的簡單協(xié)議，可簡化工作流程。

無需標(biāo)記或補償優(yōu)化步驟。

對于高級流式細(xì)胞術(shù)，細(xì)胞表型分析和細(xì)胞因子檢測如何在同一個孔中工作？

iQue ® 人類 T 細(xì)胞激活試劑盒使用多重方法同時進行激活的 T 細(xì)胞免疫表型分析和細(xì)胞因子檢測。該試劑盒提供了用于鑒定活化 T 細(xì)胞的適當(dāng)抗體，以及 用于檢測和定量分泌的 IFNg 和 TNFa 的iQue Qbeads ® 。將兩種組分與活性染料一起添加到每個測定孔中，并與細(xì)胞和上清液樣品混合物一起孵育。然后預(yù)設(shè)門控策略將熒光信號從細(xì)胞和珠子中分離出來，并自動填充隨附的模板，以表達 T 細(xì)胞群和細(xì)胞因子濃度的數(shù)據(jù)。

我想在幾天內(nèi)測量 T 細(xì)胞活化 (TCA)，我需要在不同的板中設(shè)置幾個不同的測定嗎？這會殺死細(xì)胞嗎？

iQue ® 人類 T 細(xì)胞激活試劑盒允許在一個時間過程中使用單個測定板進行多次測量。使用 T 細(xì)胞激活試劑盒進行分析只需要少量 (10 µL) 細(xì)胞和上清液樣本，這意味著一旦采集了每個樣本（在通風(fēng)柜中無菌），檢測板就可以放回培養(yǎng)箱中準(zhǔn)備好你的時間過程中的下一個樣本。在取樣之前，建議輕輕研磨內(nèi)容物以確保取樣均勻，但這不會影響細(xì)胞，也不會影響小樣本量。  

在 T 細(xì)胞激活測定中，對多重 3 種或更多細(xì)胞因子檢測是否有任何限制？我可以在此測定中測量其他細(xì)胞因子和標(biāo)志物嗎？

iQue ® 人類 T 細(xì)胞激活試劑盒可與 iQue ® 人類 T 細(xì)胞配套試劑盒結(jié)合使用，除了已包含在 T 細(xì)胞激活試劑盒中的細(xì)胞因子外，還可以測量多達 6 種人類細(xì)胞因子。Sartorius 還提供一系列細(xì)胞因子和趨化因子檢測 iQue Qbeads ®  ，以便客戶可以制作自己的附加面板，以與 T 細(xì)胞激活試劑盒進行多路復(fù)用。單個 10 µL 樣品可用于分析多達 30 種分泌蛋白，客戶可以從 50 多種分析物中選擇進行定量。而且，如果您的特定分析物不在我們當(dāng)前的產(chǎn)品組合中，iQue Qbead ® Devscreen 試劑允許您靈活地連接您自己的捕獲抗體或目標(biāo)蛋白，以獲得更加定制的個性化解決方案。

iQue 試劑盒提供了一個集成的解決方案，使高含量，高通量，流式細(xì)胞術(shù)為基礎(chǔ)的分析洞察復(fù)雜的生物學(xué)。IQueReagent 試劑盒已經(jīng)開發(fā)出來，可以在 iQueAdvanced 流式細(xì)胞術(shù)平臺上運行，并使用 iQueFozet 軟件進行分析。

生物洞察力: 多參數(shù)數(shù)據(jù)提供了一個更全面的了解細(xì)胞群體更知情的結(jié)果。速度: 在5分鐘內(nèi)分析一個96孔板或者在20分鐘內(nèi)分析一個384孔板可以得到更快的結(jié)果。易于使用: 簡化了工作流程，利用單一平臺的測定和數(shù)據(jù)分析與 iQueFogret 消除了從多個來源獲取和關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)所需的時間。小型化測定體積: 使用少至5μL，保存珍貴的樣品和試劑用于額外的分析

IQueQ 珠和 iQueQPanel 試劑盒允許您捕獲和分析不同珠型上的特定蛋白質(zhì)，用于分泌的細(xì)胞因子，粘附分子，酶，生長因子受體等的多重定量。 iQueReagent 試劑盒能夠測量多功能讀數(shù)，包括細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡，膜完整性，增殖和抗體表征，以及珠，細(xì)胞或兩者上的多種免疫細(xì)胞功能，允許您同時評估表型和功能。

抗體發(fā)現(xiàn)和開發(fā)通過在整個過程中復(fù)合抗體結(jié)合、功能和效價來提高數(shù)據(jù)吞吐量和質(zhì)量。- 抗體篩選-功能分析-細(xì)胞系發(fā)展過繼性細(xì)胞療法更快地評估多種細(xì)胞參數(shù)，減少細(xì)胞和試劑。- 免疫細(xì)胞殺傷-免疫細(xì)胞評估-細(xì)胞因子分析-小分子篩選-在整個藥物發(fā)現(xiàn)過程中對免疫生物學(xué)進行高含量的表型篩選。- 初級免疫細(xì)胞篩選-免疫功能-作用機制

可配置以滿足您的需要ーー從我們的菜單中復(fù)制多達30個分析物，并使用預(yù)配置的分析模板細(xì)胞因子分析、藥物篩選和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)4iQuadesDevscreen 試劑盒3附加您自己的目標(biāo)蛋白或捕獲抗體以獲得最大的靈活性 Plex 多達30個您自己的分析物與 iQuadesDevscreen SH,或5個分析用 iQue珠 Devscreen SAvCytokine 分析，表型篩選和抗體篩選4iQueQpanel HumanT Helper Kit 1Quantify 多達9個分析物在單個樣品中易于使用，具有預(yù)先配置的預(yù)混合試劑 sCytokine 分析,和分析 T 輔助細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子5ique 免疫細(xì)胞和基于珠子的試劑盒1評估免疫表型和功能在一個單一的測試中 T 細(xì)胞角色塑造和免疫細(xì)胞殺傷試劑盒測量免疫表型標(biāo)記，細(xì)胞健康，細(xì)胞功能和細(xì)胞因子分析標(biāo)記在一個單一的井高度可重復(fù)，簡化工作流程與最小的動手時間細(xì)胞因子分析，T 細(xì)胞生物學(xué)，免疫分型，免疫細(xì)胞殺傷和角色塑造

iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑快速分析和比較大組抗體并表征其關(guān)鍵屬性(例如抗體內(nèi)化)的能力可以大大減少候選產(chǎn)生所需的定時器并加速潛在治療治療的開發(fā)。iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑是免洗 pH 敏感染料，以簡單的基于模板的格式從20μL 樣品中鑒定抗體內(nèi)化。小鼠和人類的類型被設(shè)計用于包含小鼠或人類 Fc 區(qū)域的抗體。該測定方法具有靈活性，可以將其他經(jīng)過驗證的試劑組合起來用于具有高通量能力的多重，無洗滌方案。 iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑盒 iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑盒是高通量，多重，無洗滌測定法，測量抗體內(nèi)化，抗體特異性和來自單個，30μL 測定體積的細(xì)胞健康?？贵w很容易用 pH 敏感的抗體內(nèi)化試劑(R/Red)標(biāo)記。細(xì)胞活力也測量在同一測定使用細(xì)胞膜完整性染料(B/綠色) ，以評估一般細(xì)胞健康和抗體功能。使用相同的樣品，細(xì)胞特異性可以通過包含的 iQue 細(xì)胞增殖和編碼染料 V/Blue (Tag-it VioletTM)來表征。